|
急性胰腺炎大鼠肝脏胆汁分泌功能变化的实验研究
Experimental resarch of change of choleresis function of rat live r with caute pancreatitis
秦 炜 吴伊丽 天津医科大学实验中心 ３０００７０
主题词 急性胰腺炎； 胆汁酸； 高效液相色谱分析（acute pancreatitis;bileacid;hptc)
中国图书馆分类号 Ｒ576
摘 要 目的：观察急性胰腺炎大鼠肝脏胆汁分泌功能变化。 方法：Ｗister大鼠１１２０只，随机分为急性胰腺炎组和正常对照组，分别于不同时间引流胆汁。测量胆汁分泌量和外周静脉血胆汁酸浓度。结果：急性胰腺炎组大鼠肝脏胆汁分 泌量为0.7～0.8ml/h,对照组大鼠胆汁分泌量为1.4～1.6ml/h，（Ｐ<０.０１） ； 急性胰腺炎组大鼠外周静脉血胆汁酸浓度为1.13～1.28μg/ml，对照组大鼠外周静脉血胆汁酸浓度为0.77～0.78μg/ml，（Ｐ<0.01）。结论：急 性胰腺炎大鼠肝脏胆汁分泌功能减低。
Ａbstract Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：To study the change of bi le aci dexcretion in acute pancreatitic rats. Ｍｅｔｈｏｒｄｓ：A to tal of 120 Wistar rats were randomized into two groups. Sixty cases were in acute pancreatitic group,the others were in normal control group. Ｒｅｓｕｌｔｓ：The quantity of bile acid excreted in acute pancreatitic rats was 0.7～0.8ml/h,that of control group was 1.4～1.6ml/h,(P<0.0 1); the bile acid in poeripheral venous was 1.13～1.28μg/ml in acute pancreati tic rats,and 0.77～0.78μg/ml in control group,(P<0.01). Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：The capability of bile acid excretion in acute p ancreatitic rats was decreased.
急性胰腺炎中患者出现不同程度的黄疸，且黄疸越重，病情越严重，预后不良。长期以来，一直认为胰腺炎中胰头肿大，压迫胆总管下端，是造成黄疸的原因。有文献报道，胰腺炎中肝动脉血流量减少，肝脏能量代谢减低，ＡＴＰ合成减少。本实验排除了胆道梗阻因素在急性胰腺炎所致黄疸中的作用，旨在研究急性胰腺炎情况下，肝脏胆汁分泌功能变化在黄疸中的作用。
１ 材料与方法
1.1 动物分组 Ｗistar大鼠１２０只，体重２５０～３００g， 随机分为急性胰腺炎组和对照组，各组依不同时间分为术后3h、6h、9h三个小组（n＝２０）。
1.2 手术方法 急性胰腺炎组大鼠：按ＡＨＯ方法，大鼠１２h禁食，不禁水。２０％乌拉坦腹腔注射麻醉（0.5ml/100g），下腹正中切口入腹。小动脉夹暂时阻断胆管出肝门端，十二指肠穿孔，用导管经十二指肠逆行注入１％牛磺胆酸钠（0. 1ml/100g,0.1ml/min）。注毕１０min撤去动脉夹，拔管，缝合腹壁。制成急性胰腺炎动物模型。对照组大鼠：经胆胰管逆行注入生理盐水，制成对照组动物模型。
1.3 试剂 牛磺胆酸钠（Sigma公司出品）；胆酸标准品（天津医科大学实验中心提供）。
1.4 仪器设备 （１）ＬＤ４－２型离心机（北京医用离心机厂）； （２）ＬＣ－６Ａ高效液相色谱仪（日本岛津公司）；（３）ＰＢ１５３型电子天平（瑞士梅特勒公司）；（４）电热恒温水温箱（北京长安科学仪器厂）。
1.5 实验方法 急性胰腺炎组大鼠分别于术后１h、４h、７h，用导管经十二指肠乳头向胆管逆行穿刺，并妥善固定，用经引流胆汁法，引流时间为２h。引流结束后， 各组大鼠分别在术后３h、６h、９h，抽取股静脉血１ml。 记录各组大鼠胆汁分泌量，并用高效液相色谱分析法测量各组大鼠外周静脉血中胆汁酸浓度。
对照组大鼠实验方法同急性胰腺炎组。 组间比较用t检验。
２ 结 果
2.1 急性胰腺炎组大鼠胆汁分泌量较对照组大鼠减低有显著性， 反映急性胰腺炎中大鼠肝脏胆汁分泌功能减低见表１。
2.2 急性胰腺炎组大鼠外周静脉血胆法酸浓度较对照组大鼠升高有显著性， 反映急性胰腺炎中大鼠肝细胞受损，其胆汁摄取和分泌功能减低见表２。
表１ 对照组与急性胰腺炎组大鼠胆汁分泌量比较
|
时间 |
对照组(ml/h) |
急性胰腺炎组(ml/h) |
P值 |
|
术后1h |
1.4±0.3 |
0.8±0.3 |
<0.01 |
|
术后4h |
1.5±0.4 |
0.7±0.3 |
<0.01 |
|
术后7h |
1.4±0.3 |
0.7±0.3 |
<0.01 |
表２ 对照组与急性胰腺炎组大鼠外周静脉血胆汁酸浓度比较
|
时间 |
对照组(μg/ml) 11563 |
急性胰腺炎组(μ g/ml) |
P值 |
|
术后3h |
0.78±0.004 |
1.13±0.03 |
<0.01 |
|
术后6h |
0.78±0.05 |
1.15±0.06 |
<0.01 |
|
术后9h |
0.77±0.05 |
1.28±0.04 |
<0.01 |
３ 讨 论
急性胰腺炎患者中大约有２０％出现不同程度的黄疸，目前认为其主要原因是由于胰腺炎发病后胰头肿大，压迫胆总管所引起。有文献报道，胰腺炎中肝动脉血流量减少，肝脏能量代谢减低，ＡＴＰ合成减少。 因此肝脏胆汁分泌功能障碍，也可能是胰腺炎中造成黄疸的原因之一。在本实验在胆汁引流过程中排除了胆道梗阻在胰腺炎引发黄疸中的作用，旨在研究胰腺炎中肝脏分泌功能的变化在黄疸中的作用。
实验结果显示， 胰腺炎中， 肝脏胆汁分泌量明显减少， 由正常时的1.4～1.6ml/h，减少到0.7～0.8ml/h，说明急性胰腺炎中大鼠肝脏胆汁分泌功能明显降低。在各种肝胆疾病中，血清胆汁酸是较血清胆红素更为敏感的检测指标。正常血清中胆汁酸浓度的维持依赖于肝细胞对胆汁酸的摄取及吸收能力。本实验中胰腺炎大鼠血清胆汁酸浓度升高，说明肝细胞损伤是造成急性胰腺炎大鼠胆汁排泄障碍的因素之一。
急性胰腺炎无论病因如何，它的最终结果总是局部和全身炎症反应，它与炎性介质的过度生成有关。胰腺炎中引起肝细胞损伤的炎性因子主要为肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor TNF）。胰腺炎时胰腺的腺泡细胞可产生ＴＮＦ， 而大量侵入胰腺的白细胞则是ＴＮＦ的最主要来源。ＴＮＦ主要由肝细胞清除，故血清中难以分离到ＴＮＦ。胰腺炎中胰腺高浓度的ＴＮＦ无疑是加重了肝细胞的负荷。同时胰腺炎中肠道菌群异位，内毒素大量吸收。张群华等发现，胰腺炎中内毒素的增加可刺激胰腺、肝脏快速合成TNF α mRNA，并高水平表达。 当ＴＮＦ产生超过肝细胞中ＴＮＦ受体数量时，过量的ＴＮＦ进入血液循环，可诱导肝细胞炎症反应，是胰腺炎导致肝细胞损伤的重要机制。
ＴＮＦ的致病机制是它能作为重要的始发因子作用于多种细胞，在细胞和亚细胞水平上激发一系列极联反应，诱导ＩＬ－６、ＩＬ－１等基因表达。活化ＰＬＡ ２，致使花生四烯酸分解产生ＰＡＦ、ＬＴ、ＰＧＥ、ＴＸＡ２等炎症介质还能直接损伤血管内皮细胞，通过上调多形核粒细胞表面的粘附因子和内皮细胞配位子，使两者接触时间延长、且粘附更紧密，加剧内皮损伤，从而使毛细血管通透性增加，进一步加剧胰腺炎时肝细胞损伤。
肝细胞内离子浓度受到严密的调节，胰腺炎中肝动脉血流减少４０％， 肝脏氧化磷酸化过程受阻，ＡＴＰ合成减少，同时缺氧还可引起氧自由基产生。ＡＴＰ耗竭和氧化损害的结果灭活了具有维持离子梯度功能的离水泵。胰腺炎中造成肝细胞损伤的最主要离子为Ca2+离子超负荷。正常情况下肝细胞内外Ca2+离子浓度梯度达１万倍，肝细胞有很强的Ca2+离子稳态调节机制。胰腺炎时，肝细胞分泌功能减低，胆汁酸排泄障碍。现已发现疏水性胆汁酸盐是细胞毒性物质，可直接损伤肝细胞膜，增高其通透性，使Ca2+离子跨膜内流增加。肝动脉血流减少，肝细胞缺血缺氧，再加上肠道内各种内毒素吸收入血等因素，损伤线粒体结构和功能，加剧ＡＴＰ合成减少，胞膜Ca2+泵排Ca2+能力和内质网膜摄Ca2+能力下降，Ca2+离子滞留于胞内。
胞内Ca 2+离子超负荷可激活磷脂酶Ｃ和磷脂酶Ａ２，促进膜磷脂分解，使胞膜及细胞器膜受到损害，膜磷脂双层结构和膜流动性发生改变，促进胞膜泡形成，造成肝细胞致死性损伤。另外， 膜磷脂分解过程中产生的游离脂肪酸和溶血性磷脂对细胞亦有毒性作用。Ca2+离子还可激活Ca2+离子依赖性蛋白酶，促使胞内核苷酸酶、腺苷酸环化酶等降解，导致细胞损伤；被激活的Ca2+依赖性蛋白酶同时也促进了细胞骨架结构的降解，破坏肝细胞骨架结构的完整性，促使胞膜泡形成。
屈振高等观察到，急性胰腺炎大鼠内皮细胞受损，动脉血中一氧化氮（ＮＯ）含量升高。Ｄabrowski的研究指出， 急性胰腺炎时ＮＯ过量产生将引起多器官氧化反应性损害。
在肝脏，ＮＯ能影响肝细胞谷胱甘肽的代谢过程。谷胱甘肽是细胞内巯基的重要储存库，它能作为还原剂而保护多种氧化应激产生的自由基所致的组织损伤，参与体内外源性化合物解毒和多种细胞内化合物的代谢。ＮＯ是通过影响谷胱甘肽再生途径中的活性成分来调节谷胱甘肽代谢的。如影响谷胱甘肽还原酶活性、 α－谷氨酰半胶氨酸合成和质膜转运谷胱甘肽过程。ＮＯ还能与还原型谷胱甘肽结合 ，导致靶器官抗氧化能力下降，并影响巯基的大分子生物学活性。
本实验结果表明肝细胞损伤所致胆汁分泌功能下降是急性胰腺炎中产生黄疸的因素之一。
参考文献
１ 吴咸中，等．腹部外科实践．北京：中国医药科技出版社，１９９０，８２１
２ Skrede,etal. Bile acid measured in serum during fasting as a test forliver disease. Clin.Chem,1978,24:1095
３ Berry W,etal. Bile acid metabolism:its relation to clinical disease.Semin Liver Dis,1983,3:330
４ 张群华，等．生长抑制激素和生长激素对急性坏死性胰腺炎肝损伤的保护作用．中华医学杂志，１９９８，７８（８）：６２１
５ Ertel W,etal. The complex pattern of cytokines in sepsis. Associationbetween prostaglandins,cachectin and interleukins.Ann.Surg,1991,214(2) :141
６ Nicotera P,etal.Calcium- mediated mechanisms in chemically inducedcell death.Pharmacol Toxicol,1992,32:339
７ Gores GJ,etal.Plasma membrane bleb formation and rupture: acommonfeature of hepatocellular injury.Hepatology,1990,11:690
８ 屈振亮，等． 重症急性胰腺炎并发多脏器功能失常综合征时内皮素和一氧化氮的变化及药物的治疗作用．中国危重病急救医学，１９９８， １０（１０）：５９９
９ Dabrowski A,Nitric oxide contributes to multiorgan oxidative stressinacute pancreatitis.Scand.J.Gasteroenterol,1994,29(10):943
10 Kuo PC,etal.Nitric oxide decreases oxident-mediated hepatocyte
injury.J.Surg.Res,1994,56:594
收稿日期２０００－０７－０３
（责任编辑：张贵成）
| 
更多>>
