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p16、p53蛋白和增殖细胞核抗原在早期胃癌中的表达
中华实验外科杂志 1999年第6期第16卷 简 报
作者：刘勇 李启明 王夷黎 戴匡渠
单位：330006 南昌，江西省人民医院病理科
我们采用免疫组化方法观察42例早期胃癌中p16、p53蛋白和增殖细胞核抗原(PCNA)的表达，现将结果报道如下。
一、材料与方法
1. 材料 选取我院1985～1995年间外科手术切除早期胃癌标本42例。全部标本均经福马林固定，石蜡包埋。所有切片按全国胃癌协作组提出的标准复检，每例选取1～2张切片的蜡块，连续切片4 μm厚。
2. 方法 采用免疫组化(S-P)方法。多克隆抗p16抗体、单克隆抗p53抗体、单克隆抗PCNA抗体和S-P试剂盒(即用型)均购自福州迈新公司。抗p53抗体标记前切片经微波处理，修复暴露抗原。以已知阳性切片作阳性对照，以TBS代替一抗作空白对照，严格按照S-P试剂盒说明书操作，DAB显色。
3. 结果判断 免疫组化染色阳性信号为棕黄色。采用显微摄像计算机图像分析系统，每张切片检测5个视野(倍数×400)，计算PCNA阳性细胞数以及肿瘤细胞总数(每例≥200个)，求出细胞增殖指数(proliferatin index, PI)。PI=PCNA阳性细胞数/肿瘤细胞总数×100%。p16和p53的判别标准为阴性(-)――阳性细胞＜5%肿瘤细胞；阳性(+)――阳性细胞＞5%肿瘤细胞。
4. 统计学处理 实验数据的统计学分析采用t、χ2和相关性检验。
二、结果
1. p16蛋白位于细胞核，42例早期胃癌中p16阳性21例(50.0%)。p53蛋白定位于细胞核，42例早期胃癌中p53阳性23例(54.8%)。 PCNA 定位于细胞核，本组早期胃癌细胞增殖指数PI=(66.19±9.632)。42例早期胃癌中p16、p53和PCNA的表达见表1。不同组织类型、分化程度、淋巴结转移状况的早期胃癌中p16和p53表达以及PI差异无显著性(P＞0.05)。不同浸润程度的早期胃癌中p16、p53表达以及PI差异均有显著性(P＜0.05)。
表1 早期胃癌中p16、p53和PCNA的表达
生物学指标 例数 p16 p53 PCNA(PI) + % + % 组织类型 管状腺癌 22 13 59.1 13 59.1 67.87±9.864 乳头状腺癌 3 1 33.3 1 33.3 66.06±2.713 低分化腺癌 8 3 37.5 7 87.5 72.67±6.752 印戒细胞癌 9 4 44.4 2 22.2 56.98±4.757 分化程度 高分化组 25 14 56.0 14 56.0 67.43±9.915 低分化组 17 7 41.2 9 52.9 64.22±9.014 浸润程度 粘膜层 30 18 60.0 13 43.3 54.46±5.193 粘膜下层 12 3 25.0 10 83.3 72.58±6.031 淋巴结转移 阳性组 4 1 25.0 3 75.0 71.25±3.184 阴性组 38 20 52.6 20 52.6 65.63±9.107
2. 早期胃癌中，p16阳性者的PI=(54.61±9.414)、p16阴性者的PI=(73.23±8.477)，p16阴性者的PI显著高于阳性者(P＜0.01)，p53阳性者的PI=(73.39±8.637)，p53阳性者的PI显著高于阴性者(P＜0.01)。1965
3. p16阴性早期胃癌中18例p53阳性表达；p16阳性早期胃癌中5例p53阳性表达；p16阴性者的p53阳性表达显著高于阳性者(P＜0.01)，呈明显负相关(r=-0.622)。
三、讨论
细胞周期调控的分子机制涉及细胞周期蛋白(cyclin)、细胞周期蛋白依赖激酶(cyclin-dependent kinases, CDKs)以及CDKs抑制蛋白3种分子的相互作用，其核心是CDKs的活性表达及调控［1］。1994年Kamb等［2］通过染色体步移法和序列标志位点分析发现MTS1/p16基因位于人9号染色体的p21区域，目前认为p16蛋白的作用较为专一，仅在G1期竞争cyclinD与CDK4结合，抑制CDK4活性，从而抑制细胞增殖，是细胞增殖的负调控因子。我们发现早期胃癌中，p16和p53的表达与组织类型、分化程度、淋巴结转移状况无明显关系，仅与癌细胞的浸润有关。
本组实验结果显示，p16低表达和p53过表达的早期胃癌细胞增殖活跃。p16低表达与p53过表达呈明显负相关。提示p16蛋白的低表达和p53的过表达对细胞增殖有促进作用，胃癌发生过程中MTS1/p16基因的缺失与抑癌基因p53的突变可能有协同作用。
注：本课题为江西省卫生厅希望计划科研基金资助项目(No.970023)
参考文献
1 刘勇. 肿瘤细胞增殖调控的研究进展. 实用癌症杂志，1997，12：155-157.
2 KambA, Gruis NA, Weaver FJ, et al. A cell cycle regulator potentially involved in genesis of many tumor types. Science, 1994,264:436-440.
(收稿： 1999-05-10)
（来源：大中华健康网）
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