苏灵感冒颗粒中的葛根素含量测定

   苏灵感冒颗粒中的葛根素含量测定

   中国现代应用药学 1999年第2期第16卷 中药与天然药

   作者：杨 竞 林 跃

   单位：杨 竞 南京 210029 南京脑科医院；林 跃 南京 210009 中国药科大学

   关键词：葛根素；含量测定；双波长薄层扫描

    摘要 目的：对苏灵感冒颗粒进行质量控制。方法：采用双波长薄层扫描法测定苏灵感冒颗粒中主要成分葛根素的含量。结果：葛根素在0.968～4.84μg范围内线性关系良好，其平均回收率为95.69%，RSD=4.92%。结论：该方法简便、可行，适用于苏灵感冒颗粒的含量测定。

   Determination of puerarin in Suling Ganmao Keli

    Yang Jing(Yang J),Lin Yue(Lin Y)(Nanjing brain Hospital,Nanjing 210009)

    ABSTRACT OBJECTIVE：To control quality of Suling Ganmao Keli.METHODS:The puterarin in Suling Ganmao Keli was determined by TLC-Scanner.RESULTS:The linear range is 0.968～4.84μg(r=0.9990).The average recovery and RSD were 95.69% and 4.92%,respectively.CONCLUSION:This method is simple,available and suitable for assay of Suling Ganmao Keli.

    KEY WORDS puterin,assay,TLC-Scanning

    苏灵感冒颗粒系皖南山区一民间验方，后经一著名军医的整理与修订，在治疗病毒性感冒方面有奇效。现已按国家三类新药进行申报临床。其主要以葛根、牛蒡子等11味中药组成。为此根据新药审批要求，做了四味药的鉴别，一味药的含量测定，含量测定选择了本方的君药葛根，采用薄层法测定葛根中的葛根素含量。实验结果表明，方法简便、可靠，可作为苏灵感冒颗粒的质量控制方法之一。

    1 仪器及试药

    岛津CS-9000双波长薄层扫描仪。

    葛根素对照品：由中国药品生物制品检定所提供。药品来源：苏灵制药有限公司提供。

    其它试剂：均为分析纯。

    2 试验条件与结果

    2.1 扫描波长的选择

    吸取供试品液，阴性对照溶液各2μl,葛根素对照品溶液5μl。点于同一硅胶GF254板上，经展后，在紫外光灯(254nm)下检视定位，照薄层色谱扫描法进行光谱扫描，结果葛根素在265和310nm处有两吸收峰，在265nm处为最大吸收，在370nm处吸收最小，但在薄层扫描中如两波长相距超过100nm时，会影响扫描的结果，所以选择扫描波长λS=265nm,参比波长λR=360nm，线性参数SX=3进行锯齿扫描。

    2.2 线性范围考察

    分别吸取葛根素对照品溶液(每毫升含葛根素0.484mg)2,4,6,8和10μl。分别点于同一硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯-甲酸-水(8∶1∶1)为展开剂，展开12cm,取出，晾干，置254nm紫外灯下检视定位，于λS=265nm,λR=360nm波长处进行双波长扫描测定，结果见表1。

   表1 标准曲线(线性范围考察)

    (μg) 点样量

    (μg) 峰面积 回归方程 r 2 0.968 8763.23 4 1.936 16758.54 6 2.904 22034.30 y=6862.96x+2567.45 0.9990 8 3.872 29144.30 10 4.84 35787.09

    从表1可以看出，葛根素点样量在0.968～4.84μg范围内呈线性关系。测定样品点样量在此线性范围内可使用本方法进行含量测定。

    2.3 空白试验

    取不含葛根素的阴性对照品溶液点样展开，阴性对照品色谱中，在与葛根素对照品相应的位置上没有吸收。

    2.4 稳定性试验

    取葛根素标准曲线绘制项下的斑点，每隔20min进行一次扫描，共考察2h，结果尚稳定，见表2。

   表2 稳定性试验

    2.5 精密度试验

    仪器精密度试验：取薄层板上的同一斑点，连续扫描6次，结果见表3。

   表3 仪器精密度试验

    点样精密度试验：3639

    ①精密吸取等量对照品溶液5份，点于同一硅胶GF254薄层板上，展开，扫描，结果见表4。

   表4 同板精密度试验

    ②精密吸取等量对照品溶液5份，点于不同的硅胶GF254薄层板上，展开，扫描结果见表5。

    2.6 重现性试验

    取同一批号的样品，制备5份供试品溶液进行扫描测定，葛根素的含量结果见表6。

    2.7 回收率试验

   表5 异板精密度试验

   表6 重现性试验

    取已知葛根素含量的样品1g,精密称定，精密加入葛根素对照品10mg,与样品液同法制备得加样回收测定液，吸取加样回收液5μl，点于同一硅胶GF254薄层板上，同含量测定项下方法进行测定，并计算回收率，见表7。

   表7 回收率试验结果

    2.8 含量测定

    样品溶液的制备：取本品5g,精密称定，加乙醇(30,30,20ml),置水浴上加热回流提取3次，每次30min,趁热滤过，滤液浓缩至适量，转移至50ml的量瓶中，加乙醇至刻度，摇匀，作为供试品溶液。另取葛根素(供含量测定用)对照品，加甲醇制成每毫升含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典1995年版一部附录ⅥB)试验，吸取供试品溶液2μl,对照品溶液2μl、4μl分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以醋酸乙酯-甲酸-水(8∶1∶0.8)为展开剂，展开，取出，晾干。置254nm紫外光灯下检视定位，照色谱法(中国药典1995年版一部附录ⅥB)薄层扫描法进行扫描，波长：λS=265nm,λR=360nm，测量供试品吸收度积分值与对照品吸收度积分值，计算，即得。测定样品3批，结果见表8。

   表8 样品测定结果

    注：含量相差较大的原因，是由于药材品种不一样而致，药典收载的葛根有粉葛根和野葛根两种，野葛根素比粉葛根所含葛根素高得多。

    根据样品测定结果，暂定为本品每克含葛根素不得少于2.0mg。

    2.9 葛根药材中葛根素的含量测定

    供试品溶液的制备：取葛根粗粉20g,精密称定，加乙醇(20,15,15ml)，置水浴上加热回流3次，每次30min,趁热过滤至50ml量瓶中，冷却至室温，加乙醇至刻度，摇匀，作为供试品溶液。按上含量测定方法测得葛根药材中葛根素含量。测定结果见表9。

   表9 不同来源的葛根中葛根素的含量

    3 讨 论

    从以上实验可以看出葛根中葛根素的含量相差较大，药典收载的品种有甘葛藤和野葛两种。据所查文献资料报道野葛中葛根素的含量在1.6%～6.0%范围内；甘葛藤根据我们实测的两批结果，葛根素的含量在0.028%～0.47%范围内，根据原药材中葛根素含量，暂定葛根中葛根素的含量不能低于0.025%。

    该含量测定方法简便、可靠，是苏灵感冒颗粒良好的质量控制手段之一。参考文献

    [1] 王宝琴.中成药质量标准与标准物质研究.第1版.北京：中国医药科技出版社，1994∶314.

    [2] 新药审批办法及有关法规汇编(一).北京：卫生部药品审评办公室编.1992∶38.

   收稿日期：1998-06-08